青霉素由肌内注射或静脉滴注给药。1．成人：肌内注射，一日80万～200万单位，分3～4次给药；静脉滴注：一日200万～2000万单位，分2～4次给药。2．小儿：肌内注射，按体重2.5万单位/kg，每12小时给药1次；静脉滴注：每日按体重5万～20万单位/kg，分2～4次给药。3．新生儿(足月产)：每次按体重5万单位/kg，肌内注射或静脉滴注给药；出生第一周每12小时1次，一周以上者每8小时1次，严重感染每6小时1次。4．早产儿：每次按体重3万单位/kg，出生第一周每12小时1次，2～4周者每8小时1次；以后每6小时1次。5．肾功能减退患者：轻、中度肾功能损害者使用常规剂量不需减量，严重肾功能损害者应延长给药间隔或调整剂量。当内生肌酐清除率为10～50ml/分时，给药间期自8小时延长至8～12小时或给药间期不变、剂量减少25%；内生肌酐清除率小于10ml/分时，给药间期延长至12～18小时或每次剂量减至正常剂量的25%～50%而给药间期不变。6．肌内注射时，每50万单位青霉素钾溶解于1ml灭菌注射用水，超过50万单位则需加灭菌注射用水2ml，不应以氯化钠注射液为溶剂；静脉滴注时给药速度不能超过每分钟50万单位，以免发生中枢神经系统毒性反应。
青霉素类兽药用于动物肌体一般无不良反应，但对个别家畜偶见有过敏反应，严重的可产生过敏性休克。易过敏家畜以马、骡、猪、犬等多见，注射后不久出现流汗、兴奋不安、肌肉震颤、心跳加快、呼吸困难、站立不稳、抽搐等症状。因此，在用药过程中应注意观察，如出现过敏反应，应立即停止用药，同时，用肾上腺素或地塞米松进行抢救。青霉素钾盐不宜静脉注射青霉素钾盐应肌肉注射，在使用时还应注意动物的血钾变化，一般禁止大量使用，特别对高血钾病畜禁用。避免空腹时使用青霉素类兽药不宜在病畜空腹时注射，以免引起昏厥。不可随意加大剂量大剂量或超大剂量使用青霉素类兽药，可干扰凝血机制而造成出血或引起中枢神经系统中毒，引起动物抽搐、大小便失禁，甚至瘫痪等症状。也可使耐药菌迅速诱导产生分解青霉素的β-内酰胺酶。青霉素类兽药应即溶即用由于青霉素类药物的水溶液不稳定，在室温下溶解的时间越长，其效价就越低，致敏物质也不断增加。所以应做到即溶即用，以确保药效。注意配伍禁忌磺胺类钠盐与青霉素混合，会使青霉素失效；青霉素与庆大霉素合用，会使庆大霉素失效；青霉素与四环素、氯霉素、碳酸氢钠、维生素C、阿托品、氯丙嗪等混合使用，也会失效。
