一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。 4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。 药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少
提取植物蛋白的常用方法包括机械破碎、溶解、离心、过滤和沉淀。
首先，将植物材料破碎成细小颗粒，然后用溶液将蛋白质从细胞中释放出来。
接下来，通过离心将细胞碎片和杂质分离。
然后，使用过滤器去除残留的固体颗粒。
最后，通过沉淀方法将蛋白质从溶液中沉淀下来。这些步骤可以根据具体需求进行调整和优化，以获得高纯度的植物蛋白。
1、盐析法
原理：盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
2、有机溶剂法
原理：机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质脱除水化膜，而易于聚集形成沉淀 。
3、等电点法
原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。
植物蛋白质提取方法有多种，以下是一些常用的方法：
氯醋酸-丙酮沉淀法：将植物样品在液氮中研磨，加入提取液并在低温条件下过夜，然后离心去除上清液。
磷酸盐缓冲液提取法：将植物样品研磨后加入磷酸盐缓冲液，经过离心去除残渣，得到上清液。
三氯醋酸提取法：将植物样品加入三氯醋酸溶液中，经过离心去除上清液，然后用乙醇沉淀蛋白质。
酚酸提取法：将植物样品加入酚酸溶液中，经过离心去除上清液，然后用乙醇沉淀蛋白质。
酶解法：使用特定的酶对植物样品进行酶解，使蛋白质从细胞中释放出来。
这些方法各有优缺点，适用于不同类型的植物和实验需求。在选择提取方法时，需要根据具体情况进行选择，并根据实验目的进行优化和调整。
