冻干粉菌种的保存和复苏步骤如下:
1. 保存:对于冻干粉菌种的保存,一般采取深冻的方法,具体步骤如下。
a. 将需要保存的菌种在适宜的条件下进行培养,使其处于旺盛生长的状态,然后进行冻干处理。
b. 将冻干后的菌种转移到安瓿瓶中,进行密封,以隔绝空气和水汽的接触,防止菌种被污染。
c. 将密封好的安瓿瓶存放在-30℃到-80℃的冰箱中保存。
2. 复苏:冻干粉菌种的复苏需要按照一定的步骤进行。
a. 首先,根据菌株供应商提供的培养信息,准备相应的固体和液体培养基。
b. 打开安瓿瓶,用0.5-1mL液体培养基重悬管内的菌体。若菌种为真菌,则建议将菌悬液转移至5-6mL无菌水中室温孵育数小时,孵育时间越长,菌株的活性越高。
c. 若是进行液体培养,则将菌悬液全部取出,接种至5-6mL液体培养基中。若为固体平板培养,则需要将菌悬液按200μL/板的量接种至固体培养基平板上。
d. 在合适的条件下进行培养,通常情况下会在2-5天内长菌,少数菌株会需要更长的培养时间。
按照以上步骤操作后,冻干粉菌种就可以顺利地复苏了。不过,在操作过程中需要注意以下几点。
a. 对于冻干粉菌种的保存,一定要选择适宜的低温条件,如-30℃到-80℃的冰箱中。
b. 在复苏过程中,要注意防止菌种被污染,因此需要选择合适的培养基和操作环境。
c. 在操作过程中,需要全程做好防护措施,如穿戴清洁的工作服和手套等,防止菌种被污染。
d. 实验过程中产生的废弃物必须先灭菌,然后才能丢弃,以防止病菌的传播。
以上是冻干粉菌种的保存和复苏方法,供您参考。