1.天堂山水库管理局
惠州有七个湖：西湖、白盆湖、红花湖、白鹭湖、通湖、金山湖、天堂湖。
1.惠州西湖是惠州乃至广东最美的湖泊，面积3.13平方公里。它是东江和西枝江交汇处自然形成的大型城市湖泊。自古以来，它就以其自然之美和深邃的外表而闻名于世。它被称为竹箦西子并且有中国36个西湖，只有惠州和杭州。
2.白盆珠水库又称白盆珠水库，位于东江支流西枝江上游。因库区形似盆地，故更名为白盆珠，总库容12.2亿立方米，水库水面面积约40平方公里。是白盆珠水库修建后形成的人工湖。是惠东县和惠州市最大的水库，广东省第四大水库。
三。红花湖位于惠州著名的西湖风景区。它曾经是惠州西湖的三大水源之一，是一个水幕瀑布惠州西湖八大名胜之一。它建于1991年，以湖区最高峰张宏华的名字命名。湖泊面积1.62平方公里，属于人工湖。这里山环水绕，山、瀑、瀑重叠。
4.白鹭湖原名胶东水库，是在一个天然湖泊的基础上兴修水利形成的水库。是惠州面积较大、生态环境保存较好的人工湖。湖区面积约2.7平方公里，青山绿水环绕。湖岸曲折，海湾、分支遍布。湖中有许多小岛，是惠州最美的湖泊之一。
5.通湖是广东省的古老湖泊之一。通湖湿地是广东省一个大型典型的内陆淡水湖湿地。其中，通湖面积约30平方公里，是一个天然湖泊，也是惠州最大的天然湖泊。
6.金山湖位于金山湖公园内，属于城市公园湖泊类型，水域面积约1.8平方公里。分为黄金河口景区、黄金内湖景区、黄金门户景区、黄金休闲景区。沿着弯曲的栈道，穿过湖中央的栈桥，走到湖的对岸是可行的。水质清澈，俯瞰湖面，景色宜人。湖边有许多高层住宅，错落有致，为湖面增色不少，是惠州最美的。
七。龙门天堂山水库位于龙门县地派镇，是一座大(二)型水库，控制集雨面积461平方公里，总库容2.43亿立方米，正常蓄水位150米。它被誉为天堂湖由龙门人所建，是一年四季风景秀丽的人工湖之一。这里青山绿水，四季气候宜人。山和湖相得益彰，形成了美丽而精致的自然景观。
2.望天堂水库
遥望天堂，憧憬未来。
3.天堂山水库管理局官网
惠州主要水库(共100余次):水口沙井水库、胶东水库、莲塘埠水库、黄沙水库、刘屋坑水库、狮子水库、招远水库、仲恺区官垌水库、碗窑水库、井仔头水库、大亚湾石头河水库、鱿鱼湾水库、博罗县仙岗水库、龙门县范家田水库、天堂。
2010年至2010年，平乐县山川秀美，名胜古迹千处，山川雄伟，自然风光独特，构成了丰富的旅游资源。丰富的自然旅游资源，喀斯特地貌发育，气候温暖，雨量适中，形成了良好的自然环境。由于平乐县历史悠久，境内多民族聚居，造就了众多的人文旅游资源。主要旅游资源有平乐温泉、冷水石景苑、金荣千年古榕群和千年古街、桂江风景区、漓江风景区、茶江风景区、阴山亭、宫铃寺、金山应县洞、粉岩、朝天岩、青龙月亮山、源头月亮山等风景：1。山峰平乐县以中低山、丘陵和喀斯特地貌为主，有9座1000米以上的山峰。(1)狮子山：位于县城东南30公里，青龙乡大岗村南，主峰海拔1292.7米。松林和冷杉林是主要的森林，它是大港河的发源地。(2)葫芦顶：位于县城东南31公里，青龙乡大岗村以南。主峰海拔1271米，树木繁茂。(3)九十九桩：位于县城东南40公里，源头镇兰东村以西。主峰海拔1164.6米，是县内的原始森林，金荣河发源于此。(4)天堂山：位于县城东南35公里，源头镇义东村以东，主峰海拔1038米，主峰云雾缭绕，林木葱郁，义东水库在山脚。(5)莲花山：位于县城东南14公里，二塘镇谢佳村以南。主峰海拔953.4米。主峰形似莲花，故名。以松树和杉树为主，产金银花等药材。南坡是燕子林，山上是圣谷寺。(6)圣山：位于县城中央31公里处，阳安乡，主峰海拔834米。环境优美，泉水甘甜清澈，森林茂密。东与桂林第二大平口水库相连。据说在古代，有两个仙女叫谭曾在此修道的何家，故名。(7)昭山：在平乐镇漓江与茶江交汇处，山在水中，方如印度，故又称阴山。竹子在山上是绿色的，相对高度约30米，顶峰约100米见方。山上有一些绿亭(又称阴山亭)，石阶可达山顶。山腰上有两块青石，上面写着中立。昭山点翠是平乐八景之一。(8)石人山：位于县城以南20公里，大发瑶族乡广云村以北，主峰海拔645米。它的主峰是以一个无头石人命名的。相传宋朝的杨在南道上路过此地，夜间疑是仇人，一箭射死了他。2.溶洞(1)朝天岩：位于平乐县二塘镇唐乐村南，距二塘镇约4公里。山洞在石山的半山腰，距离地面约60米。因开口宽敞而得名。这是一个大厅洞穴。
4.天堂山水库管理局地址
概况：水边镇位于英德市西南部，距英德市区64公里。1993年，经省人大批准美国政府作为一个革命老区。位于小北以西3公里处，为偏远山区，多为低谷山地，亚热带季风气候，年平均气温21，年降雨量1880mm。东北被小北河环绕，西南与大东镇相连，有林地13.2万亩，森林覆盖率68%。总面积103平方公里，辖8个村委会，1个社区居委会，139户村民团体。2003年底，全镇总人口18515人，其中农业人口17052人，占总人口的92%。非农业人口1463人，占总人口的8%。此外，还有300多名华侨、港澳台人士。地理位置：位于英德市西南，东经113？40?北纬24？15?东西长10公里，南北宽17公里，面积170平方公里。它位于大东、沙坝、西牛和连江口镇的交界处。市政建设和规划：辖8个村委会和1个社区居委会。2003年底，全镇面积1.3平方公里。镇保护体系项目已立项，拟建设为商务区、行政服务区、生活区、教学区四大功能区。对外交通：小北江中下游交通枢纽。有200吨级的货运码头通过水路连接大北河。上航可直达韶关、阳山，上航可直达广州、珠三角。公路贯穿沙坝、九龙、107国道，经英德市与京珠高速、英佛公路、尹莹公路相连。环库公路可经李希大桥和尹莹公路到达清远和广州。健康状况：有初中1所，小学10所，适龄儿童入学率98%。有一个保健设施，保健网络遍布城市和农村地区。招商引资项目：温泉生态旅游度假区综合开发，热水路岔梯级电站、香坑电站、五城电站、镇安别电站、黄澍电站等水电开发项目，五角石材厂、材竹加工厂，天堂山森林公园开发。乡镇企业：水边镇雨量充沛，资源丰富。现有骨干企业红星水电站、1999年建成的马草坑水电站、2000年建成的山坑水电站，总装机容量1600千瓦，年发电量650万千瓦时。今年，镇政府投资80万元安装了200千瓦的黄澍水电站，目前已基本完工，预计10月份投产。小水电是水边镇的经济支柱产业。同时还引进外资创办了水边铁厂、淀粉厂、家具半成品厂、新型塑料制品厂和四家民营竹签厂。今年乡镇企业实际完成产值1498万元，增长290万元，增长24%。旅游资源：旅游资源丰富，位于水边镇东南部，距政府约6公里的水边温泉。该地区周围的公路直接穿过温泉，温泉占地1。8平方公里，水质清澈，出水量大，水温高达60c。水中含有锶、硅、硫等对人体有特殊保健作用的矿物质，对皮肤病有显著疗效。周围的村民经常用这种水治疗各种皮肤病。目前。温泉已进入发展初期，拥有12间淋浴房，营业面积近2000平方米。但由于投入不足，他们的档次较低，未来有待发展。天堂山，位于水边和大洞的交界处，自然植物种类繁多，景色优美，景色迷人，也是游客的好去处。历史：它是
水边镇自古以来就是沙坝、水边、大东镇的农副产品集散地。有三个专业市场，总面积3000平方米。通讯、交通、供电、供水：全镇已开通有线电话，传真、互联网全面开通，手机信号覆盖率达85%；有线电视进村；水陆交通便利，已建成年货物吞吐量200万吨的滨水码头，水路连接大北河。北航直飞阳山县，下一班飞机直飞清远，三水入珠江。新铺设的二级柏油路自北向南贯穿全镇，经西牛、九龙穿过107国道，东至尹莹(德)银湛公路到达清远。热水路已铺水泥路面，与环库路、白坑路、六九路、西大线形成四通八达的交通网络。电力充足，电价低。市场供水工程已建成投入使用，为投资置业提供了有力保障。农业：该镇以农业为主，林业、手工业、商业和贸易为其服务。水域6058亩，旱地1754亩，林地13万亩，森林覆盖率68%。优质水稻年产量8000亩，占水稻面积的80%以上。在稳定粮食面积的基础上，大力发展经济作物。山药、葛根是水边特产，口味独特，知名度高，远销英德、清远、珠三角等地。2008年种植山药1500亩、葛根1500亩、冬瓜400亩，今年新种植蚕桑2500亩。同时，发展山地优势，竹笋在原有面积的3。在3万亩的基础上，今年的新发展是1。8万亩，共计5个。万亩，基本实现人均3亩以上，原来的1。88万亩，增长0。8万亩，共计2。68万亩，村委会集体经济实现了250多亩笋山基地。大力扶持种养户，收入10万元以上大户10户以上，中等收入3万元以上50户以上。今年社会总产值6764万元，增长558万元，增长9%，其中农业总产值4998万元，增长535万元，增长12%，农民人均纯收入2826万元，增长368元，增长15%。有两个职业农民临水市场，总面积3000多平方米。自古以来就是大东、沙坝、西牛、棉棉、连江口等城镇的农产品集散地之一。移民：飞来峡水库建设的影响，水边是移民涉及的城镇之一。我们镇有260个移民，1313人。除探亲访友为7个户外名额外，253户全部落户水边新街移民区。为了让移民搬出去，稳定点，买得起，我们积极组织动员移民利用水位以下的耕地发展经济作物。2000年，在牧民耕种的水位以下的耕地和坝地上种植了大豆、花生、山药和养蚕等经济作物。同时，立足当地资源，扶持建立了两个竹签加工厂，通过山货交易会以及其他方式。通过一系列措施，2000年移民区人均收入增加了300多元。目前，水边镇政府加大基础设施建设力度，逐步发挥集镇整体功能，营造良好投资环境，以优惠政策加强招商引资，诚邀客商来我镇投资。
5.天堂山水库管理局领导班子
你们这些傻逼把自己的家乡说的一文不值。谁不不要说我的家乡好？如果有能力，不妨投资上亿，在长宁创业。你真是一个智商和情商都很差的人。自己命不好，还得要求别人命不好，伤心、
010~1010年，北东向的云开山受罗定弧形构造影响，在桂子-界弧段向南派生出两条近南北向的支脉山。东部有共和山(1298米)、火铜坑顶(1315米)、龙须顶(1327米)、铜锣顶(1065米)、石人顶(1310米)、银燕顶、白马山、泳儿肩(1548米)和尖峰顶(1280米)，其他有恒山(919米)、大山渡山(1100米)、竹园顶(1302米)、阿婆基山、大天顶山、被子山和鸡骨山[3]
西列广西，分两山。第一列是七星顶(位于郁南县南部，海拔617米)、罗云大山(岑溪-罗定界山，海拔814.7米)、大芒顶(岑溪-罗定-新沂界山，海拔1044米)、南翁山(荣县-新沂界山，海拔1053.7米)、狗脊顶(海拔1053.7米)
第二列为通用山(苍梧-郁南界山，海拔753.1米)、周公顶(岑溪中部海拔885.1米)、大翁顶(岑溪南部海拔933米)、山(北流至容县海拔1274.1米)、谢先章(鲁
太大了 给你复制点吧
水稻秸秆纤维素发酵转化燃料乙醇的研究
摘要
我国水稻秸秆资源丰富，年产量达3亿多吨。利用水稻秸秆生产燃料乙醇，对
来我国能源问题、实现节粮代粮和环保有着巨大的潜力和广阔的应用前景。水稻秸
要成分是纤维素，对纤维素的利用最主要的限制性因素是将纤维素转化为可发酵还
解决的办法主要有两类途径:(l)提高纤维素酶生产的经济性，主要涉及纤维素酶高
获得及纤维素酶的生产技术，提高其合成效率以降低单位纤维素酶生产成本;(2)提
素酶利用效率，主要涉及纤维素酶解催化过程，以降低单位可发酵还原糖生产成本
本研究从菌种的选育着手，研究了菌株的产酶特性，用响应面策略优化发酵培养基，
了SL发酵罐分批发酵生产高活力纤维素酶技术;分离纯化了纤维素酶;构建了代
二糖的酿酒酵母工程菌;对酿酒酵母工程菌细胞固定化发酵进行了研究，利用二级
生物反应器祸合系统生物协同酶解水稻秸秆发酵生产燃料乙醇等。主要研究结果如
1.筛选到一株纤维素酶高产菌株(PenicilliumYT01)，原生质体紫外诱变后
变株YT02，YT02以水稻秸秆为碳源，豆饼粉和硫酸钱为氮源，在29”c，初始p
酵12Oh，纤维素酶活力达到最高，摇瓶发酵滤纸酶活(FPA)、CMC酶活(CMcas
葡萄糖昔酶活(CB)分别达3.86IU/mL、207.41IU/mL和l.4oIU/mL。
2.用响应面方法(RSM)优化的发酵培养基组成为:水稻秸秆为41.95留L，
为24.83g/L，数皮为22.16叭，困H4)2504、KHZpO4为4g/L，MgSO;为0.sg/L;起始
以优化的培养基发酵120h，滤纸酶活、cMc酶活和p一葡萄糖普酶活分别达到
IU/mL、357.41IU/mLand3.704IU/mL。远高于优化前的纤维素酶活水平。
3.在SL发酵罐中研究了温度、pH值和溶氧对菌体生长和产酶的影响，确定
发酵的工艺条件为:0一32h时发酵温度犯”C，溶氧70%;犯h至1加h发酵结果发
29oc，溶氧50%，发酵液初始pH值6.0，发酵%h滤纸酶活、CMC酶活和p一葡
酶活分别达到11.13IU/mL、465.24IU/mLand4.08IU/mL，均高于摇瓶发酵水平，
酵动力学过程显示，突变菌YT02菌体生长和纤维素酶各组分均为部分祸联。
4.利用DEAEsephadexA一25和sephadexG一75分离纯化了二个内切葡
(CMCase)和一个p一葡萄糖营酶，CMCase纯化倍数为13.48，回收率为10.54%，
糖昔酶纯化倍数为18.62，回收率为8.62%，经SDS一PAGE得到单蛋白分子条带，
I
、沪’_心钳3卜“’门尸，..
量测定分别为73kDa、43kDa和57.8kDa，并对其进行了N端测序和质谱分析。
5.以生产乙醇性能优良的酿酒酵母菌株NAN一27作为工程菌株的受体菌。利用
能良好的多拷贝整合型载体pYMIKP，使纤维二糖代谢基因BGLI整合到酿酒酵母
体上。从而在酿酒酵母工业菌株中建立了稳定的纤维二糖代谢途径，拓展了酒精生
物利用范围，降低了纤维二糖对纤维素酶解的抑制作用。采用海藻酸钙凝胶包埋固
纤维二糖酿酒酵母工程菌，固定化细胞与游离细胞相比，发酵时间缩短，乙醇产率提
以上，并能有效地利用水稻秸秆水解液进行酒精发酵。
6.对水稻秸秆酶解过程中底物性质、酶解温度、酶解pH、底物浓度及纤维素
等关键因子进行了研究。由于YT02纤维素酶系中纤维二搪酶活力较低(CB/F队为
经稀酸稀碱预处理后的水稻秸秆纤维素对乙醇转化率仅为18%。采用代谢纤维二糖
母工程菌游离细胞发酵，可部分去除纤维二糖对酶解的抑制，水稻秸秆纤维素对乙
率可提高至20%。进一步利用采用海藻酸钙凝胶包埋固定代谢纤维二糖酿酒酵母工
酵，水稻秸秆纤维素对乙醇转化率可达26%。这方面的研究结果有助于深入了解纤
的协同降解机制。
7.将纤维原料的酶解、固定化代谢纤维二搪酿酒酵母工程菌的作用有机祸联，
新型的二级串联式生物反应器，在该反应器体系的协同作用下，可有效解除纤维二
萄糖对纤维素酶的反馈抑制作用，促进纤维原料水稻秸秆的酶水解，发酵40h，乙
达25.5留L，纤维素对乙醇的转化率达43.0%(纤维素对乙醇的理论转化率为56.61
是游离细胞同时糖化发酵(SSF)的1.65倍，生产效率达0.64留(Lh)。采用分批添料
酶解发酵工艺，可提高纤维底物的终浓度达250岁L，产物乙醇的终浓度66.51留L，
高了纤维素酶的利用率和乙醇生产效率，降低乙醇的生产成本。该反应器性能稳定
效率高，固定化细胞可以重复使用，便于自动化控制。
关键词:纤维素酶，水稻秸秆，酿酒酵母，燃料乙醇，串联式生物反应器
目录
摘要..............................................................……
ABSTRACT..........................................................……IH
第一章文献综述
l水稻秸秆资源及其降解方式............................................……l
1.1水稻秸秆的组成与结构..…，................................……，.……l
1.2水稻秸秆的预处理..................................................……3
1.2.1物理方法预处理水稻秸秆..........................................……3
1.2.2化学方法预处理水稻秸秆..........................................……3
1.2.3生物方法预处理水稻秸秆..........................................……4
1.3水稻秸秆纤维素的降解方式..........................................……4
1.3.1水稻秸秆的酸水解................................................……5
1.3.2水稻秸秆的酶水解................................................……5
2纤维素酶的性质与用途................................................……6
2.1纤维素酶的多酶体系................................................……6
2.2纤维素酶的分子结构................................................……7
2.3纤维素酶的作用机理................................................……9
2.4纤维素酶的分子量大小.............................................……10
2.5纤维素酶的最适反应条件与稳定性...................................……11
2.6纤维素酶的应用...................................................……H
3纤维素酶的生产.....................................................……12
3.1纤维素酶的生产菌种选育...........................................……12
3.2纤维素酶的生产...................................................……14
4水稻秸秆原料生物转化燃料乙醇.......................................……15
4.1燃料乙醇的优越性和使用现状.......................................……15
4.2水稻秸秆纤维素生物转化燃料乙醇的方法.............................……16
4.2.1分步水解发酵法生产燃料乙醇.....................................……16
4.2.2同步糖化发酵法生产燃料乙醇.....................................……16
i
4.2.3固定化细胞发酵生产燃料乙醇.....................................……17
4.3酉良酒酵母途径工程应用于燃料乙醇的生产.............................……17
5本研究的目的、意义和主要内容.......................................……19
5.1本研究的目的和意义...............................................……19
5.2本研究的思路和技术路线...........................................……20
5.3本研究的主要内容.................................................……21
第二章纤维素酶高产菌株的选育及产酶条件研究.........................……23
1材料与方法..........................................................……23
1.1材料.............................................................……23
1.1.1试剂与溶液配制.................................................……器
1.1.2菌种与菌种分离源...............................................……24
1.1.3培养基.........................................................……24
1.1.4主要仪器与设备.................................................……25
1.2方法.............................................................……25
1.2.1水稻秸秆的预处理...........................……，.，...........……25
1.2.2纤维素酶高产菌的分离与纯化.....................................……25
1.2.3纤维素酶高产菌的初步鉴定.......................................……25
1.2.4纤维素酶高产菌的原生质体紫外诱变...............................……25
1.2.5YTOZ产纤维素酶的液体发酵培养方法...............................……26
1.2.6不同预处理水稻秸秆的酶水解.....................................……27
1.2.7分析方法.......................................................……27
2结果与分析.........................................................……29
2.1不同预处理水稻秸秆的各组分含量...................................……29
2.2纤维素酶高产菌的分离与筛选.......................................……29
2.3纤维素高产菌YT01的菌种鉴定......................................……31
2.4纤维素酶高产菌YT01的原生质体紫外诱变............................……31
2.5液体发酵培养基成分与发酵条件对YT02产纤维素酶的影响..............……32
2.5.1不同碳源对YT02产酶的影响......................................……32
2.5.2不同预处理水稻秸秆对YT02产酶的影响............................……33
2.5.3不同氮源对YT02产纤维素酶的影响................................……34
ii
2.5.4微晶纤维素添加量对YT02产纤维素酶的影响........................……35
2.5.5不同无机盐对YT01产纤维素酶的影响..............................……35
2.5.6起始pH对YT01产纤维素酶的影响.................................……36
2.5.7装液量对YT02产纤维素酶的影响..................................……37
2.5.8转速对YT02产纤维素酶的影响....................................……37
2.5.9培养温度对YT02产纤维素酶的影响................................……38
2.5.10接种量对YT02产纤维素酶的影响.................................……39
2.5.n培养时间对YT02产酶的影响.....................................……40
2.6纤维素酶的酶学性质研究...........................................……41
2.6.1温度对纤维素酶各组分酶活的影响................................……41
2.6.ZPH对纤维素酶各组分酶活的影响..................................……41
2.7纤维素酶对不同预处理水稻秸秆的酶解试验...........................……42
3结论与讨论...............................................··········……4:l
3.1关于筛选出的纤维素酶高产菌株....................................……4:3
3.2纤维素酶生产菌的改造............................................……招
3.3青霉YT02产酶条件与酶学特性.....................................……44
第三章YT02产纤维素酶发酵培养基的优化研究..........................……45
1材料与方法....................................···.·················……45
1.1材料.............................................................……45
1.1.1试剂................................................·.·.·······……45
1.1.2供试菌种.......................................················……45
1.1.3培养基................................................·········……45
1.1.4主要仪器与设备.................................................……46
1.2方法.............................................................……4尽
1.2.1实验设计.............................................··········……46
1.2.2培养方法.............................................··········……46
1.2.3分析方法.......................................................……46
2结果与分析..............................................···········……47
2.1部分因子实验筛选发酵培养基的主要影响因子.........................……47
2.2最陡爬坡实验逼近发酵培养基最优点.................................……50
111
2.3中心组合设计优化YT02发酵培养基组成..............................……51
2.4发酵过程中PH、残余还原糖与纤维素酶变化的测定结果.................……59
3结论与讨论...................................……，...............……61
第四章YT02分批发酵产纤维素酶的研究................................……63
材料与方法.........................................................……63
.1材料.............................................................……63
.1.1试剂...........................................................……63
.1.2菌株...........................................................……63
.1.3培养基.........................................................……娜
.1.4主要仪器.......................................................……64
方法.....................·······……
.1用于分批发酵的种子培养.........……
.…64
.…64
1.2.2恒温分批发酵对YT02产纤维素酶的影响.............................……64
1.2.3变温分批发酵对YT02产纤维素酶的影响.............................……64
1.2.4溶氧量对YT02分批发酵产纤维素酶的影响...........................……64
1.2.5分段溶氧对YT02分批发酵产纤维素酶的影响.........................……65
1.2.6分析方法.......................................................……65
2结果与分析.........................................................……65
2.1发酵温度对YT02产纤维素酶的影响结果..............................……65
2.2变温发酵对YT02产纤维素酶的影响结果..............................……68
2.3溶氧对YT02产纤维素酶的影响结果..................................……69
2.4分段溶氧分批发酵对YT02产纤维素酶的影响结果......................……72
3结论与讨论.........................................................……73
第五章YT02产纤维素酶的分离纯化及酶学性质研究...........……
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材料与方法…
.1材料.……
.1.1试验材料.
.1.2主要试剂.
....……76
.....……76
.3常用储备液及缓冲液....................................……
1.1.4主要仪器........................................................……78
1.2方法..............................................................……78
1.2.1蛋白质浓度的测定方法...........................................……78
1.2.2纤维素酶的分离纯化.............................................……79
1.2.3纤维素酶SDS一PAGE凝胶电泳纯化及酶相对分子量的测定..............……83
1.2.4酶蛋白的N端测序...............................................……85
1.2.5酶蛋白的质谱分析...............................................……86
2结果与分析.........................................................……87
2.1DEAE一SephadexA一25阴离子交换层析结果.............................……87
2.1.1层析收集管酶蛋白同洗脱缓冲液NaCI浓度的关系.....................……87
2.1.2层析收集管酶蛋白活性检测.......................................……88
2.25即hadexG一75分子筛凝胶过滤层析结果..............................……88
2.2.1SephadexG一75分子筛凝胶过滤层析分离酶蛋白......................……88
2.2.2分子筛凝胶过滤层析纤维素酶活测定结果...........................……88
2.3纤维素酶各纯化步骤纯化情况.......................................……89
2.4SDS一PAGE聚丙烯酸胺凝胶电泳.......................................……90
2.4.1SDS一PAGE聚丙烯酸胺凝胶电泳银染结果.............................……90
2.4.2纤维素酶分子量SDS一PAGE凝胶电泳测定结果........................……91
2.5酶蛋白的N端测序结果.............................................……91
2.6酶蛋白的质谱分析结果.............................................……93
3结论与讨论.........................................................……94
第六章酿酒酵母纤维二糖代谢途径的构建及其细胞固定化研究.............……96
材料和方法................................................·········……%
1材料.............................................................……96
1.1菌株和质粒.....................................................……96
1.2分子克隆用酶和试剂.............................................……96
1.3水稻秸秆水解液的制备...........................................……97
2方法.............................................................……98
2.1含纤维二糖酶基因(及咒1)的重组质粒pYMIKP一那艺了的构建方法.......……98
2.2酿酒酵母纤维二糖代谢途径的搭建方法.............................……99
1.2.3酿酒酵母工程菌细胞的固定化方法................................……101
1.2.4固定化酵母细胞发酵方法........................................……102
1.2.5分析方法......................................................……102
2结果与分析........................................................……103
2.1表达及范了基因的重组菌株的构建结果...............................……103
2.1.1目的基因及法了的获得...........................................……103
2.1.2含目的基因那Z了重组质粒的构建.................................……103
2.1.3酿酒酵母工业菌株NAN一27转化子的获得二，........................……104
2.1.4转化子NAN一28细胞纤维二糖酶活性测定结果.......................……1()4
2.2不同固定化条件对NAN一28细胞固定化的影响结果.....................……105
2.2.1不同溶剂对固定化细胞转化纤维二搪的测定结果......……，.......……105
2.2.2不同海藻酸钠浓度对固定化细胞凝胶特性的影响....................……l()5
2.2.3酵母包埋量对固定化细胞转化纤维二糖的影响结果..................……!06
2.3固定化细胞与游离细胞分批发酵实验结果............................……l()6
2.4固定化细胞重复分批发酵试验结果..................................……107
3结论与讨论........................................................……108
3.1酉良酒酵母纤维二糖代谢途径的构建.................................……108
3.2酿酒酵母工程菌细胞固定化.......................................……110
第七章串联式生物反应器转化水稻秸秆生产燃料乙醇的研究..............……112
材料与方法........................................................……112
l材料......................................……，..............……112
1.1试剂.........................................................……112
1.2菌种.........................................................……112
1.3主要仪器与设备...............................................……112
2方法...........................................................……112
2.1稻草粉的预处理................................................……112
2.2纤维素酶的制备................................................……113
2.3稻草粉的酶解糖化..............................................……113
2.4水稻秸秆生物转化燃料乙醇......................................……114
2.5测定方法......................................................……115
vi
2结果与分析........................................................……116
2.1不同预处理方法对水稻秸秆糖化效果的影响结果......................……116
2.2不同温度对水稻秸秆糖化效果的影响结果............................……116
2.3不同pH对稻草粉糖化效果的影响结果...............................……117
2.4不同加酶量对稻草粉糖化效果的影响结果............................……118
2.5不同底物浓度对稻草粉糖化效果的影响结果..........................……118
2.6水稻秸秆同步糖化发酵(SSF)结果.................................……119
2.7串联式反应器转化水稻秸秆生产乙醇................................……120
2.7.1固定化NAN一28细胞发酵生产燃料乙醇结果.........................……120
2.7.2串联式生物反应器的稳定性结果..................................……121
2.7.3分批添料式协同酶解发酵生产燃料乙醇结果........................……122
3结论与讨论......................................................··……122
3.1二级串联式生物反应器生产乙醇....................................……122
3.2分批添料式协同酶解发酵工艺......................................……123
3.3水稻秸秆资源的全利用............................................……123
第八章结论.....................................................……124
主要参考文献......................................................……126
英文缩写与主要符号表...............................................……146
本研究的特色与创新.................................................……147
发表与待发表的学术论文及成果.......................................……148
致谢............................................................……149
作者简介..........................................................……150
你要看哪部分？
